SERVIZI DI ELETTROFORESI MONODIMENSIONALE

L’elettroforesi su gel di Poliacrilammide (PAGE) è una delle tecniche più utilizzate per separare macromolecole, incluse DNA, RNA e proteine.

L’elettroforesi è in generale il progressi nel quale si applica un campo elettrico per far ‘muovere’ molecole cariche all’interno di una soluzione. In questa tecnica, la mobilità di una molecola carica è direttamente proporzionale alla sua carica netta e alla resistenza della soluzione nella quale si sta muovendo.

Il Sodio Dodecil Solfato (SDS) è un detergente anionico, e le sue molecole possiedono carica netta negativa all’interno dell’intervallo di pH nel quale sono disciolte. Una catena polipeptidica lega una certa quantità di SDS in proporzione alla sua relativa massa molecolare, e la carica negativa dell’ SDS distrugge la maggior parte della struttura complessa delle proteine, specialmente dopo un processo di riduzione con betamercaptoetanolo oppure Ditiotreitolo (DTT). A questo punto le proteine sono completamente srotolate dalla loro struttura complessa a gomitolo di partenza, e riescono a ‘serpeggiare’ in modo che la loro mobilità dipenda esclusivamente dalla loro massa molecolare o peso molecolare. L’estratto proteico, reso così facilmente analizzabile, viene caricato su un gel di poliacrilammide e le proteine migrano secondo il loro peso molecolare apparente, in questo modo vengono separate e possono essere analizzate anche in modo semi quantitativo. l’SDS PAGE è largamente utilizzato nelle analisi proteomiche incluso la determinazione della taglia della proteina, l’identificazione della proteina, l’analisi della purezza della proteina, l’identificazione dei ponti disolfuro e la quantificazione della proteina.

Colorazioni disponibili: Coomassie Colloidale, Colorazione Argentica compatibile con Spettrometria di Massa.

Bioinformatica: Analisi quantitativa delle bande di monodimensionale.

Validazione con anticorpi: Servizi di immunoblotting su membrane di nitrocellulosa (semidryblot) con  chemiluminescenza e metodi colorimetrici.

Per pesi molecolari inferiori ai 10 KDa, sono disponibili servizi per l’identificazione di piccole molecole polipetidiche (peptidi/proteine) sul gel di tricina.

 

SERVIZI DI ELETTROFORESI BIDIMENSIONALE

L’elettroforesi bidimensionale (2-DE) è un metodo potente largamente utilizzato, dal punto di vista del potere risolutivo, per l’analisi di complesse miscele di proteine estratte da cellule, tessuti, o altri fluidi biologici. Questa tecnica separa le proteine in base a due proprietà indipendenti che sono il Punto Isoelettrico (pI) e il Peso Molecolare (MW) in due momenti separati. Ogni spot risultante da questo array bidimensionale corrisponde ad una singola specie di proteina nel campione oggetto dell’analisi. Quindi migliaia di differenti proteine  possono essere separate, ottenendo quindi informazioni circa il punto isoelettrico, il peso molecolare e l’abbondanza relativa nel campione.

Colorazioni disponibili: Comassie Colloidale, Colorazione con Sali d’ Argento compatibile con la spettrometria di massa, Colorazione in Sypro Ruby e analisi 2D DIGE (different in gel electrophoresis con cianine)

Analisi di immagine con software dedicati, inclusa analisi statistica delle differenzeAnalisi bioinformatica: String, Panther.